Skip to content

Przyczepność komórek śródbłonka w czasie rzeczywistym. Pomiary in vitro za pomocą analizy obrazu konfokalnego w tandemie.

3 miesiące ago

158 words

Pomiary adhezji komórka-podłoże w komórkach śródbłonka w czasie rzeczywistym uzyskano za pomocą tandemowego skaningowego mikroskopu konfokalnego miejsc kontaktu ogniskowego (zrosty ogniskowe) na powierzchni komórek abluminalnych. Ogniskowe miejsca kontaktu zostały ostro zdefiniowane (niski poziom luminancji) w żywej komórce, tak że obrazy mogły zostać wzmocnione, zdigitalizowane i odizolowane od innych szczegółów komórkowych. Miejsca kontaktu ogniskowego są głównym wyznacznikiem adhezji komórka-substrat. Pomiary (a) ogniskowej powierzchni kontaktu i (b) bliskości kontaktu (odwrotna luminancja) zostały użyte do nominalnego zdefiniowania adhezji pojedynczej komórki lub pola komórek oraz do zarejestrowania spontanicznych i indukowanych zmian adhezji komórek w czasie rzeczywistym . Topografia kontaktów ogniskowych została oszacowana poprzez obliczenie odległości separacji od wartości promieniowania za pomocą techniki kalibracji opartej na optyce pierścieni interferencyjnych. Chociaż zaobserwowano nieco bliższy kontakt między błoną komórkową a podłożem w lub blisko środka każdego kontaktu ogniskowego, odległości rozdzielenia w obszarach adhezji zawsze wynosiły <50 nm. Odejmowanie kolejnych obrazów ujawniło ciągłą spontaniczną przebudowę pojedynczych zrostów ogniskowych w niezaburzonych komórkach w czasie <1 min. Pomimo rozległej przebudowy ogniskowych miejsc kontaktu adhezja komórkowa obliczona dla całej komórki w wydłużonych okresach różniła się o <10%. Gdy stabilność cytoszkieletu była osłabiona przez ekspozycję na cytochalasynę lub gdy komórki były eksponowane na enzym proteolityczny, adhezja śródbłonkowa szybko spadła. Takie zmiany rejestrowano na poziomie pojedynczych komórek, grup komórek i przy pojedynczych ogniskowych zrostach. W obu niezakontraktowanych i zmanipulowanych komórkach dynamika przebudowy i cechy adhezji komórek różniły się znacznie między poszczególnymi miejscami w tej samej komórce; zniknięcie istniejących witryn i pojawienie się nowych często nastąpiło w ciągu kilku minut, podczas gdy sąsiednie witryny przeszła minimalną przebudowę. Skanowanie tandemowe analizy obrazu konfokalnego komórek żywych w czasie rzeczywistym dostarcza powtarzalnych informacji przestrzennych, czasowych i ilościowych dotyczących adhezji komórek. Takie podejście powinno pozwolić na dokładniejsze ilościowe analizy interakcji między macierzą pozakomórkową, białkami adhezyjnymi, integrynami i cytoszkieletem w żywej komórce. [podobne: laryngolog wikipedia, borówka amerykańska kalorie, toxocaroza ]

0 thoughts on “Przyczepność komórek śródbłonka w czasie rzeczywistym. Pomiary in vitro za pomocą analizy obrazu konfokalnego w tandemie.”